一、产品概述
由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔源抗小鼠Ki-67（Mki67）蛋白多克隆抗体（货号：IHC-00375），经抗原亲和纯化，专门优化用于免疫组织化学（IHC）检测。Ki-67是被广泛接受的细胞增殖标志物，在细胞周期的G1、S、G2及M期表达，而在静止期（G0）细胞中完全缺失。该蛋白定位于细胞核，其表达水平与多种肿瘤的增殖指数、分级及预后密切相关。本抗体识别小鼠Ki-67蛋白C端区域的特异性表位，适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片及冰冻切片的增殖细胞检测，是临床前研究及肿瘤模型评估的可靠工具。
二、详细规格
参数 | 规格
靶标 | Ki-67
反应种属 | 小鼠
应用 | IHC（免疫组织化学）
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
形式 | 全IgG
免疫原 | 小鼠Ki-67蛋白第1875–1925位氨基酸之间的区域（参考序列CAA58026.1）
抗体类型 | IgG
偶联物 | 未偶联
纯度 | 抗原亲和纯化
抗原种属 | 小鼠
浓度 | 250 ug/ml
储存温度 | 2 - 8 °C
有效期 | 自收货之日起1年
缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠
注：根据抗体制备记录，该抗体识别的表位精确对应于小鼠Ki-67蛋白第1650–1700位氨基酸（GeneID 17345，蛋白编号CAA58026.1）。不同数据库注释可能存在异构体差异，但本抗体经验证可特异性检测全长Ki-67。
三、产品制备与质量控制
本抗体采用固相载体固定的小鼠Ki-67特异性表位进行亲和纯化。免疫原为重组蛋白或合成肽段，对应小鼠Ki-67蛋白C端附近区域。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。
每批次质控标准：
IHC（FFPE）：对小鼠脾脏、胸腺、小肠或肿瘤组织切片进行染色，应在生发中心、隐窝基底及肿瘤增殖区呈现清晰的核阳性信号，而静息淋巴细胞或上皮细胞阴性。
特异性验证：使用Ki-67敲除组织或抗体预吸附实验确认信号特异性。
批次间一致性：通过对照组织切片的染色强度及阳性率进行比对。
四、推荐应用与实验条件
本抗体经优化主要用于免疫组织化学检测。以下为推荐的起始条件：
应用 | 推荐稀释度 | 备注
IHC（福尔马林固定石蜡包埋切片） | 1:100 – 1:500 | 必须进行抗原修复。推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复，可显著增强染色信号。也可试用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），但效果可能略逊。
IHC（冰冻切片） | 1:100 – 1:500 | 切片固定后（如4%甲醛或丙酮）可直接染色；抗原修复通常非必需，但可尝试温和修复。
注意 | - | 在某些样本或实验体系中，抗体可进一步稀释至1:1000以上，建议使用者进行梯度滴定优化。
五、背景信息
Ki-67是一种高分子量核蛋白（小鼠Ki-67分子量约320–360 kDa，由于高度重复序列及磷酸化，电泳迁移率异常），其表达严格与细胞周期偶联：
细胞周期依赖性表达：在G0期完全缺失；G1早期开始出现，S期和G2期逐渐累积，M期达到峰值；有丝分裂结束后迅速降解。因此，Ki-67阳性率直接反映细胞群体的增殖分数。
亚细胞定位动态变化：在间期定位于核仁及核基质；在M期，与染色体表面结合，参与维持染色体外周结构。
分子功能：虽然具体生化活性尚未完全阐明，但研究表明Ki-67参与：
核仁结构的组织与维持；
异染色质与常染色质边界的划定；
有丝分裂期间核膜重建的调控；
核糖体RNA合成（与核仁纤维中心相关）。
研究及诊断价值：
Ki-67是组织病理学中最经典的增殖标志物，具有以下应用：
肿瘤分级与预后判断：在乳腺癌、淋巴瘤、胶质瘤、肺癌等多种人类肿瘤中，Ki-67增殖指数（阳性细胞百分比）与肿瘤恶性程度、转移风险及患者生存期呈显著相关。本抗体虽针对小鼠，但广泛用于人源肿瘤异种移植模型（PDX、CDX） 中评估人肿瘤细胞增殖活性。
药物疗效评估：在肿瘤学临床前研究中，通过比较治疗组与对照组的Ki-67阳性率，可快速评价抗增殖药物的效应。
正常组织增殖区定位：用于识别小肠隐窝、皮肤基底层、生发中心、胚胎组织等增殖活跃区域。
六、储存与稳定性
储存条件：2 - 8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集及非特异性背景升高。
有效期：自收货之日起1年，在未稀释、2-8°C避光保存条件下可维持完整效价。
运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。
防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。
七、注意事项
1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。本抗体针对小鼠抗原，不保证对人Ki-67的交叉反应，若需检测人样本，请选择人反应性产品。
2. 抗原修复至关重要：对于FFPE切片，必须进行热诱导抗原修复，否则染色信号极弱或完全阴性。推荐优先尝试Tris-EDTA pH 9.0缓冲液。
3. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液请按有害物处理。
4. 对照设置：每次IHC实验必须设置阴性对照（以同浓度兔IgG或抗体稀释液替代一抗）及阳性对照（已知高增殖小鼠组织，如小肠或脾脏生发中心）。
5. 稀释优化：不同固定时间、组织类型及检测系统可能导致最佳稀释度差异，建议进行预实验梯度滴定（1:100, 1:200, 1:500）。
