CY3.5-TCO 为兼具红光荧光特性与 IEDDA 生物正交反应活性的双功能标记试剂，分子架构分为三部分：Cy3.5 荧光发色母核、烷基或 PEG 柔性连接链、反式环辛烯（TCO）反应官能团。该产品凭借四嗪介导的快速点击化学反应与近红外荧光显像双重优势，可应用于活细胞标记、生物样本追踪以及纳米载体的表面修饰工作。
一、光谱参数｜Cy3.5 发色单元成像基础
两种产品剂型溶解区分
1、脂溶性 CY3.5-TCO：可溶于 DMSO、甲醇、二氯甲烷，多用于有机相改性 PLGA、疏水纳米材料；
2、磺化水溶性 CY3.5-TCO：直接溶于中性 PBS 缓冲液，适配蛋白标记、活细胞水相孵育实验。
关键：末端 TCO 官能团不会干扰 Cy3.5 原有荧光光谱与发光效率。
二、反应特性｜TCO-四嗪 IEDDA 超快点击化学
1. 反应原理
TCO（反式环辛烯）与四嗪发生逆电子需求狄尔斯-阿尔德（IEDDA）[4+2] 环加成反应，脱除氮气生成稳定二氢哒嗪共价环结构。
2. 核心反应优势
• 反应速率超快：速率常数 10⁵~10⁶ M⁻¹・s⁻¹，常温 PBS 体系数分钟完成偶联，效率远超 DBCO-N₃ SPAAC 反应；
• 无金属催化：全程无需铜离子，无细胞Poison 性，兼容活细胞与活体体内原位修饰；
• 靶向专一性强：生理环境只特异性结合四嗪基团，不和氨基、羟基、巯基发生副反应，非特异性结合极低；
• 反应条件温和：pH7.0～8.5 生理环境即可反应，适配细胞培养液、血清复杂体系。
配对底物
仅可与各类四嗪修饰原料反应：四嗪多肽、四嗪标记抗体、Tetrazine-PEG-PLGA、四嗪改性 DSPE 磷脂、四嗪修饰无机纳米颗粒。
三、实际应用全景
1. 生物大分子定点荧光标记
多肽、抗体、蛋白预先用四嗪-NHS 活化引入四嗪位点，再与 CY3.5-TCO 点击标记，制备荧光探针，用于免疫荧光染色、流式细胞分析；也可对细胞膜蛋白原位活体标记，追踪蛋白胞吞转运路径。
2. 纳米药物载体可视化修饰
• 高分子纳米粒：修饰四嗪的 PLGA 纳米球与 CY3.5-TCO 偶联，体外观测细胞摄取效率、活体追踪靶向富集；
• 脂质体体系：四嗪-DSPE-PEG 掺入脂质双分子层，表面定点荧光标记，监测药物体内循环与脏器分布；
• 无机纳米载体：四嗪改性介孔硅、四氧化三铁磁珠，偶联后构建荧光-磁性双模态诊疗探针。
3. 小动物活体近红外成像
660nm 发射波长组织穿透性良好，背景荧光干扰小，用于靶向制剂体内药效评价、tumor边界荧光定位。
4. 双荧光正交共定位
搭配 CY3.5-TCO（TCO-四嗪）+Cy5-DBCO（DBCO-N₃）双标记体系，载体同步修饰叠氮与四嗪，实现双通道荧光共定位观测。
选型速记
DBCO 配对叠氮反应偏慢，TCO 搭配四嗪瞬时偶联；
NHS 遇水极易水解失效，TCO 生理环境稳定性更佳；
Cy3.5 负责红光荧光示踪，活体靶向标记优选 CY3.5-TCO。
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