Atto 465 NHS Ester，Atto465-NHS，实现高分辨率多通道成像
Atto 465 NHS Ester（简称Atto465-NHS）是一种高性能荧光活性试剂，由Atto 465荧光染料通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯活化形成的衍生物。Atto 465属于小分子有机荧光染料，其紫蓝色激发特性与窄发射光谱使其在多色荧光标记实验中具有独特优势。通过NHS酯端，Atto465-NHS可与蛋白质、肽、核酸及其他含胺基的生物分子进行共价偶联，形成稳定的荧光标记复合物。
Atto465-NHS结合了高荧光亮度、优良光稳定性和良好水溶性，可在温和条件下高效标记生物分子，同时保持其天然功能。其激发波长约为465 nm，发射波长约为505 nm，适合多通道荧光成像和共定位实验，特别是在细胞和组织多色标记中，可与绿色、红色和远红色荧光染料组合，实现高分辨率多通道成像。
化学组成
Atto 465染料核心
分子结构：Atto 465属于小分子有机荧光染料，结构包含共轭芳香体系，提供高量子产率和强荧光亮度。
取代基：染料侧链可含磺酸盐或极性基团，增强水溶性，减少在生物体系中的非特异性结合。
光学特性：激发峰约465 nm，发射峰约505 nm，发射窄、亮度高、光漂白低。
NHS酯活化端
化学性质：NHS酯是一种羧酸活化衍生物，可与胺基反应生成稳定的酰胺键。
反应机理：在pH 7.2–8.5缓冲体系中，生物分子胺基对NHS酯碳原子进行亲核攻击，形成共价酰胺键并释放N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为副产物。
特点：高特异性、温和条件下完成反应，不破坏蛋白质或核酸结构。
偶联分子特性
NHS酯通过柔性碳链与染料核心连接，使偶联后荧光信号不受空间阻碍影响。
偶联后形成稳定酰胺键，可在缓冲液、细胞环境及组织中长期保持稳定。
分子量较小，偶联后对靶分子空间构象和功能影响小。
结构特点
荧光核心结构
多环芳香共轭体系提供高量子产率和光稳定性。
紧凑的结构减小标记后的空间位阻，适合偶联大分子。
光谱窄，激发和发射峰明确，可用于多通道荧光实验。
亲水性侧链与NHS酯端
側链的极性或磺酸基提高水溶性，降低非特异性结合，保证均一分布。
NHS酯通过短柔性链连接，保证荧光核心和标记分子空间分隔，偶联效率高。
整体结构特点
荧光核心提供信号，亲水侧链保证溶解性，NHS活性端提供偶联功能。
化学结构优化了荧光性能、水溶性及偶联效率，适合标记蛋白质、核酸、肽及小分子。
物理与化学性质
外观与溶解性
干燥状态下为淡紫蓝色固体粉末，便于称量和储存。
可溶于DMSO、DMF、乙腈等有机溶剂，水溶液溶解性有限，可稀释后使用。
光学特性
激发波长：约465 nm
发射波长：约505 nm
荧光亮度高，光漂白低，适合活细胞及固定细胞实验。
化学稳定性
干燥避光条件下长期稳定。
NHS酯在水中易水解，应在有机溶剂中溶解后立即使用。
稳定性高，适合温和缓冲条件下的偶联反应。
功能特点
蛋白质与肽标记
可标记蛋白质赖氨酸残基及肽氨基端，形成稳定酰胺键。
用于Western blot、ELISA、免疫荧光染色及蛋白质追踪研究。
细胞与组织成像
可用于固定或活细胞染色，实现蛋白质、糖蛋白及细胞器的分布观察。
紫蓝荧光可与绿色、红色、远红色染料组合，实现多通道共定位。
流式细胞分析
高亮度与光稳定性保证多通道流式分析精确可靠。
可用于免疫表型研究、细胞分类及药物筛选。
生物分子追踪与定量
可用于蛋白质、糖蛋白、酶标底物及纳米颗粒的追踪与定量分析。
高量子产率保证检测灵敏度和信噪比。
多通道共标实验
紫蓝波段荧光信号与其他染料互补，适合多色共定位及高分辨率显微实验。
特点总结
高亮度紫蓝色荧光，量子产率高。
光稳定性好，光漂白速率低。
NHS酯端高效偶联，温和条件下完成，不破坏生物分子结构。
水溶性良好，亲水侧链减少非特异性结合。
小分子量，偶联后对目标分子影响小。
多通道实验兼容性强，适合共定位及多色成像。
应用范围
蛋白质与肽标记
免疫荧光染色与细胞器追踪
流式细胞分析及免疫表型研究
多色荧光共定位实验
纳米颗粒与药物载体追踪
总结
Atto 465 NHS Ester（Atto465-NHS）是一种紫蓝色荧光活性试剂，通过NHS酯端可与蛋白质、肽、核酸及含胺基小分子形成稳定酰胺键。其化学结构包括荧光核心、亲水侧链和NHS活性端，兼顾荧光亮度、光稳定性、水溶性及偶联效率。激发波465 nm、发射波505 nm，具有高量子产率和窄发射光谱，广泛应用于蛋白质标记、细胞成像、流式细胞分析、多通道共定位及纳米颗粒追踪实验，是现代分子和细胞生物学研究的重要荧光工具。
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