蛋白质N端测序技术
蛋白质表达起始于N端，蛋白质N端序列对于蛋白的功能、蛋白稳定性、以及在细胞中的定位都有着重要作用，因此蛋白质N端序列分析能为蛋白质功能、定位等研究提供重要依据。
一、测序原理
1、Edman降解测序法
蛋白质Edman测序流程
Edman测序循环包括3步： 1. 在碱性条件下，PITC与蛋白N端的游离氨基结合
* 在酸性溶液中，N端残基被切除|PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间不同，从而确定氨基酸种类。
2、质谱测序法
蛋白质质谱测序流程
质谱测序原理是将蛋白质经胰蛋白酶酶切后，直接用串联质谱测定酶切肽段混合物，然后通过一级质谱选择N端肽段离子进行串联质谱分析而得到N端序列。能够对混合蛋白、末端封闭或糖基化的蛋白质进行测序。
二、测序平台
1、SHIMADZU PPSQ-33A测序仪
SHIMADZU PPSQ-33A测序仪
平台优势
• 高灵敏度检测PTH-氨基酸 • UV-VIS探测器SPD-20A • 稳定分析微量样品 • 准确区分分子量相近的氨基酸（I/L、Q/K） 2、Obitrap Fusion Lumos质谱仪
Obitrap Fusion Lumos质谱仪
平台优势
测序亮点
• 可测定多种形式的样品：蛋白溶液、PVDF蛋白条带 • 仅需1-10 ug蛋白样品即可完成检测 • 可测定蛋白N端多达70个氨基酸序列 • 全自动序列分析，序列分析更准确 • 测序不受N端封闭，PEG和糖基化等N端修饰的影响
